微量细胞转录组测序
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案例解析
结果展示
送样须知
Q&A
①技术介绍
微量细胞转录组测序Smart-seq2技术是一种基于单细胞或极少量RNA样本的高精度转录组测序方法，其核心原理是顺利获得模板转换（Template switching）技术实现全长cDNA的高效扩增。该技术顺利获得末端转移酶在反转录产物末端添加寡核苷酸序列，结合PCR扩增，突破了传统方法对样本量的限制，能够从单个细胞或pg级RNA中获取覆盖全转录本的基因表达信息，尤其适用于低丰度RNA的检测。
②技术路线
③测序平台：Illumina/MGI PE150
④测序深度：6-12G
⑤交付周期：20个工作日
微量细胞转录组测序送样标准
细胞样本
以1-1000个细胞为宜（最适细胞数为20-200个），过多的细胞会对反应有一定的抑制作用，细胞活力不低于80%（AO/PI染色检测）。
RNA样本
mRNA具有poly(A)结构，一般要求RNA 28S/18S ≥1，RIN ≥7，浓度＞50pg/μL。
注意事项
推荐每个样本采集三个以上的重复，每一个样品加入裂解液后，立即置于干冰上，再操作下一个样品。取样完成后再根据实际情况进行-80℃储存或者干冰运输至实验室。
Q1：Smart-seq2需要多少RNA起始量？
A1：通常提取得到Total RNA≥10ng即可满足下游实验，且基因表达量无太大影响。建库RNA最低起始量不足1ng虽然可满足文库质量要求，但是对部分基因定量有一定影响。此外RNA质量即RIN>7.0且无明显降解才能往下游进行建库测序实验。
Q2：微量细胞分离方法有哪些？
A2：微量细胞分离主要有四种方法：激光显微切割、流式细胞仪分选、微流控芯片分选和口吸管法分离。现在武汉生物DG视讯DG采用的是流式细胞仪分选，该方法能够保障目标细胞群有极高的纯度，能够根据表面受体密度的差别来分离不同细胞，同时能够分选出百万分之一的稀有细胞。
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